bubuk Iptgdapat digunakan sebagai tempat tindakan anestesi lokal, digunakan sebagai agen penyebar untuk-pereda nyeri luka pasca operasi dan nyeri maag. Reagen biologis molekuler yang biasa digunakan dalam skrining titik biru dan putih dan IPTG menginduksi ekspresi protein pada bakteri. IPTG, nama lengkap isopropil- - D-tiogalaktosida, CAS 367-93-1, rumus molekul C9H18O5S, berat molekul 384,37 Dalton, termasuk dalam senyawa molekul kecil. Bubuk berwarna putih atau hampir putih, dengan kelarutan rendah dalam air tetapi kelarutan lebih baik dalam pelarut organik. Terdapat gugus ionik dalam molekulnya, sehingga mereka memiliki tingkat konduktivitas tertentu dalam air. Stabil pada suhu kamar, tetapi mudah terurai pada suhu tinggi atau kondisi asam dan basa kuat. Tidak ada bau yang jelas, tetapi sedikit bau senyawa organik mungkin keluar saat digunakan. Ini adalah penginduksi yang umum digunakan untuk menginduksi ekspresi protein pada bakteri. Dalam diagnosis medis, IPTG dapat berfungsi sebagai probe fluoresen atau agen kromogenik untuk mendeteksi molekul atau jaringan tertentu dalam sampel. Dengan menggabungkan dengan molekul target, IPTG dapat menghasilkan sinyal fluoresen atau perubahan warna, sehingga memberikan dukungan kuat untuk diagnosis penyakit.
|
Morfologis |
Bubuk Kristal |
|
Warna |
Putih |
|
Titik lebur |
105 derajat C |
|
Titik didih |
350,9 derajat C (perkiraan kasar) |
|
Kepadatan |
1,3329 (perkiraan kasar) |
|
Kondisi penyimpanan |
2-8 derajat C |
|
kelarutan alkohol |
larut larut 40 bagian pelarut |
|
Koefisien keasaman (pKa) |
13.00 ± 0.70 ( Diprediksi ) |
|
Larut dalam air |
50mg/ml |
|
Titik nyala |
197,8 derajat |
|
Kelarutan |
1.6g/l |
|
Kepadatan uap |
5.21 (vs udara) |
|
Indeks bias |
1,5060 (perkiraan) |
|
|
|
bubuk Iptg,Parameter fisik, Mp. : 114 ~ 121 derajat C , Deskripsi penggunaan , Reagen biologi molekuler umum, biasa digunakan dalam skrining biru-putih dan ekspresi protein yang diinduksi IPTG-pada bakteri. , Spesifikasi kemasan, 1G, 5G, 25G, 100G, 1KG, Kondisi penyimpanan
Didinginkan 2-8 derajat, terlindung dari cahaya , Deskripsi bahaya , Kode bahaya : Xi , Tingkat risiko : R36 / 37/38 , Tingkat keamanan : S23-24 / 25-36.
IPTG biasanya digunakan dalam eksperimen kloning yang perlu menginduksi aktivitas -galaktosidase. Ini sering digunakan dalam kombinasi dengan X-Gal atau Bluo-Gal untuk penyaringan biru-putih dari koloni bakteri rekombinan, yang dapat diinduksi oleh Chemicalbook untuk mengekspresikan lac operon di E. coli. IPTG berikatan dengan protein represor lacI dan mengubah konformasinya untuk mencegah penghambatan gen lacZ yang dikodekan oleh -galaktosidase.
IPTG, nama lengkap isopropil- -D-tiogalaktosida adalah penginduksi yang umum digunakan untuk menginduksi dan mengatur ekspresi protein. Karena struktur dan fungsinya yang unik, IPTG biasanya dibuat dengan menggunakanbubuk Iptgmetode sintesis di laboratorium.
Rute Sintetis
1. Sintesis glikosida:
Sintesis pertama -D-tiogalaktosida biasanya disintesis dengan metode sintesis glikosida, dengan mengkondensasi galaktosa dengan basa yang sesuai (seperti isopropil). Langkah ini memerlukan penggunaan kelompok pelindung untuk menghindari pembentukan-produk sampingan dalam reaksi selanjutnya.
2. Reaksi fosforilasi:
Berdasarkan sintesis glikosida, gugus fosfat dimasukkan melalui reaksi fosforilasi untuk memperoleh gugus isopropil- -D-tiogalaktosida-5'-fosfat ester. Langkah ini memerlukan penggunaan fosfat dan anhidrida atau asam yang sesuai.
3. Kelompok deproteksi:
Melalui reaksi gugus deproteksi, gugus pelindung dalam glikosida dihilangkan untuk mendapatkan produk target isopropil- - D-tiogalaktosida. Langkah ini memerlukan penggunaan larutan asam atau basa untuk memfasilitasi reaksi.
Langkah-langkah percobaan:
Siapkan reagen dan instrumen:
Siapkan gula, basa, gugus pelindung, fosfat, anhidrida atau asam yang diperlukan, pelarut, dan reagen lainnya, serta instrumen percobaan yang diperlukan seperti pengaduk, termometer, spektrofotometer, dll.
Sintesis glikosida:
Panaskan dan aduk galaktosa dengan basa yang sesuai dalam pelarut, tambahkan katalis, dan promosikan reaksi kondensasi. Langkah ini memerlukan kontrol suhu dan waktu pengadukan yang ketat untuk memastikan kelancaran reaksi.
Reaksi fosforilasi:
Glikosida yang disintesis dipanaskan dan diaduk dengan fosfat, anhidrida, atau asam dalam pelarut, dan katalis ditambahkan untuk mendorong reaksi fosforilasi. Langkah ini memerlukan pengendalian suhu dan waktu pengadukan, dengan tetap memperhatikan polaritas dan dosis pelarut untuk menjamin kemajuan reaksi dan pembentukan produk.
Kelompok deproteksi:
Hapus gugus pelindung dari produk fosforilasi dalam larutan asam atau alkali untuk mendapatkan produk target isopropil- - D-tiogalaktosida. Langkah ini memerlukan pengendalian nilai pH dan suhu, dengan tetap memperhatikan polaritas dan dosis pelarut untuk menjamin kemajuan reaksi dan pembentukan produk.
Pemisahan dan pemurnian:
Produk target dipisahkan dari campuran reaksi melalui kromatografi kolom, rekristalisasi, dan metode pemisahan dan pemurnian lainnya. Langkah ini memerlukan perhatian terhadap kondisi pengoperasian seperti suhu, dosis pelarut, laju aliran, dll. untuk memastikan kemurnian dan hasil produk.
Analisis dan identifikasi:
Identifikasi struktural produk target dilakukan melalui metode analisis seperti resonansi magnetik nuklir dan spektrometri massa. Langkah ini memerlukan penggunaan instrumen, perlengkapan, dan sarana teknis yang sesuai untuk memastikan struktur dan kemurnian produk.
bubuk Iptgnama lengkap isopropil- - D-tiogalaktosida adalah penginduksi yang umum digunakan untuk menginduksi dan mengatur ekspresi protein.
1. Induksi ekspresi protein:
IPTG berperan penting dalam induksi ekspresi protein. Ini adalah penginduksi yang banyak digunakan yang secara efisien dapat menginduksi ekspresi gen spesifik pada bakteri, sehingga memperoleh protein target yang diinginkan dalam waktu singkat. Mekanisme kerjanya adalah mengikat gen lacI bakteri, menghambat aktivitas protein pengatur transkripsionalnya, sehingga membuka operon lac bakteri dan memulai ekspresi gen target. Saat menggunakan operon laktosa sebagai promotor ekspresi protein, diperlukan penginduksi, dan IPTG dapat bertindak sebagai analog laktosa untuk menginduksi ekspresi galaktosidase pada Escherichia coli. Itu tidak dapat dimanfaatkan oleh sel untuk mencapai ekspresi berkelanjutan. IPTG berikatan dengan lac|produk, menyebabkan perubahan konformasi menjauh dari lacO, sehingga mengaktifkan transkripsi. Regulasi transkripsional yang dapat diinduksi ini telah menjadi elemen yang umum digunakan dalam konstruksi vektor sistem ekspresi E. coli.
2. Regulasi ekspresi gen:
IPTG memainkan peran penting dalam regulasi ekspresi gen. Sebagai reagen eksperimental yang penting, ia memainkan peran penting dalam regulasi ekspresi gen dan eksperimen ekspresi berlebih protein. Dengan mengontrol waktu penambahan dan konsentrasi IPTG, regulasi ekspresi protein target dapat tercapai. Efek regulasi ini didasarkan pada pengikatan IPTG ke lac|produk dalam operon laktosa, mengubah konformasinya, sehingga meninggalkan lacO dan selanjutnya mengaktifkan transkripsi. Mekanisme regulasi transkripsional yang dapat diinduksi ini menjadikan IPTG sangat penting dalam bidang penelitian seperti fungsi gen, interaksi protein, dan skrining obat.
3. Kristalisasi protein:
Dalam percobaan kristalisasi protein, IPTG digunakan sebagai penginduksi untuk mendorong kristalisasi protein. Mekanisme kerjanya adalah mengubah konformasi protein dengan mengikat daerah hidrofobik dalam protein, sehingga mendorong agregasi dan kristalisasi antar molekul protein. Proses agregasi dan kristalisasi ini bersifat reversibel, sehingga kristalisasi protein dapat diinduksi dengan menambahkan IPTG, atau kristal protein dapat dilarutkan dengan menghilangkan IPTG.
Dalam percobaan kristalisasi protein, IPTG biasanya ditambahkan ke dalam larutan protein dengan konsentrasi akhir 1mM. Konsentrasi IPTG yang rendah ini dapat menghindari induksi protein yang berlebihan, sehingga mencapai efek kristalisasi yang lebih baik. Pada saat yang sama, IPTG juga dapat berfungsi sebagai pendamping molekuler untuk membantu pelipatan dan agregasi protein yang benar, sehingga memperoleh kristal protein yang lebih seragam.
Perlu dicatat bahwa IPTG tidak mendorong kristalisasi protein di semua kasus. Beberapa protein tidak sensitif terhadap IPTG, atau karena struktur dan sifat bawaannya yang tidak sesuai untuk kristalisasi, validasi eksperimental dan pengoptimalan diperlukan untuk protein yang berbeda guna menentukan kondisi dan metode kristalisasi yang optimal.
Reaksi yang merugikan
Sitotoksisitas
Toksisitas terhadap sel prokariotik
Meskipun IPTG umumnya digunakan untuk menginduksi ekspresi gen pada sel prokariotik, konsentrasi IPTG yang tinggi mungkin memiliki efek toksik pada sel prokariotik. Penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi IPTG yang terlalu tinggi dapat mengganggu proses metabolisme normal di dalam sel. Misalnya, hal ini dapat mempengaruhi metabolisme energi sel, mengganggu jalur seperti glikolisis dan siklus asam trikarboksilat, menyebabkan penurunan produksi ATP intraseluler dan mempengaruhi pertumbuhan dan proliferasi sel. Selain itu, IPTG konsentrasi tinggi juga dapat merusak integritas membran sel, meningkatkan permeabilitasnya, menyebabkan kebocoran zat intraseluler, dan memungkinkan zat berbahaya dari lingkungan ekstraseluler masuk ke dalam sel sehingga menyebabkan kematian sel. Eksperimen menemukan bahwa ketika Escherichia coli dikultur dalam media yang mengandung IPTG konsentrasi tinggi, laju pertumbuhan bakteri melambat secara signifikan dan jumlah bakteri yang hidup secara bertahap menurun seiring dengan bertambahnya waktu budidaya. Hal ini menunjukkan bahwa konsentrasi IPTG yang tinggi mempunyai efek penghambatan dan pembunuhan tertentu terhadap Escherichia coli.
Toksisitas terhadap sel eukariotik
Selain sel prokariotik, IPTG juga dapat menjadi racun bagi sel eukariotik. Terdapat perbedaan tertentu dalam struktur dan fungsi antara sel eukariotik dan sel prokariotik, namun IPTG masih dapat mempengaruhi fungsi fisiologis normal sel eukariotik melalui berbagai jalur. Di satu sisi, IPTG dapat mengganggu jalur transduksi sinyal dalam sel eukariotik. Transduksi sinyal di dalam sel memainkan peran pengaturan yang penting dalam proses seperti pertumbuhan, diferensiasi, dan apoptosis. IPTG dapat mengubah intensitas dan arah transduksi sinyal dengan berinteraksi dengan molekul pemberi sinyal tertentu di dalam sel, sehingga mempengaruhi aktivitas fisiologis normal sel.
Toksisitas terhadap sel eukariotik
Di sisi lain, IPTG dapat menginduksi respon stres oksidatif pada sel eukariotik. Stres oksidatif mengacu pada ketidakseimbangan antara oksidasi intraseluler dan aktivitas antioksidan, yang menyebabkan peningkatan produksi spesies oksigen reaktif (ROS). ROS yang berlebihan dapat menyerang biomolekul seperti DNA, protein, dan lipid di dalam sel sehingga menyebabkan kerusakan sel dan gangguan fungsional. Penelitian telah menemukan bahwa dalam kondisi tertentu, pengobatan IPTG pada sel eukariotik secara signifikan meningkatkan kadar ROS intraseluler, disertai dengan penurunan viabilitas sel dan peningkatan laju apoptosis. Hal ini menunjukkan bahwa IPTG dapat menginduksi respon stres oksidatif dan menimbulkan toksisitas pada sel eukariotik.
Tag populer: bubuk iptg cas 367-93-1, pemasok, produsen, pabrik, grosir, beli, harga, massal, untuk dijual