Sephadex LH-20 CAS 9041-37-6

Bentuk dan Struktur:
Gel Sephadex adalah gel manik-manik dengan-struktur jaringan tiga dimensi. Struktur ini memungkinkan gel dekstran membengkak sepenuhnya dalam air dan larutan elektrolit, membentuk lapisan gel yang stabil. Granularitas gel dekstran juga berbeda. Gel dekstran ultrahalus digunakan untuk kromatografi kolom dan kromatografi lapis tipis yang memerlukan resolusi sangat tinggi, sedangkan gel kasar dan sedang digunakan untuk kromatografi preparatif, yang dapat mencapai laju aliran tinggi pada tekanan rendah.

Kemampuan pembengkakan:
Gel dekstran mengandung sejumlah besar gugus hidroksil, yang memungkinkan gel membengkak sepenuhnya dalam larutan air dan elektrolit. Derajat pembengkakan merupakan sifat fisik penting gel dekstran, yang menentukan efek pemisahan gel dan kepadatan pengepakan kolom kromatografi. Gel dekstran tipe G-memiliki derajat ikatan silang yang berbeda-beda, sehingga derajat pembengkakan dan rentang pemisahannya pun berbeda. Tingkat pembengkakan pada dasarnya tidak dipengaruhi oleh adanya garam dan deterjen, yang memungkinkan gel dekstran mempertahankan efek pemisahan yang stabil dalam berbagai kondisi percobaan.

Stabilitas:

Ukuran partikel dan rentang pemisahan:
Granularitas gel dekstran mempunyai pengaruh penting terhadap efek pemisahannya. Gel dengan ukuran partikel berbeda cocok untuk kebutuhan pemisahan yang berbeda. Gel dekstran ultra halus cocok untuk kromatografi kolom dan kromatografi lapis tipis yang memerlukan resolusi sangat tinggi, sedangkan gel kasar dan sedang cocok untuk kromatografi preparatif. Selain itu, rentang pemisahan gel dekstran juga bervariasi menurut derajat ikatan silangnya. Misalnya, rentang pemisahan gel dekstran G-10 kurang dari 700, yang cocok untuk pemisahan zat bermolekul kecil; Gel sephadex G-200 memiliki rentang pemisahan 5000-600000, yang cocok untuk pemisahan dan pemurnian zat makromolekul.

Pemasangan dan keseimbangan kolom:
Gel dekstran perlu diolah terlebih dahulu sebelum digunakan, termasuk pembengkakan dan pemuatan kolom. Pembengkakan adalah dengan merendam gel kering dalam air suling setidaknya selama 24 jam, dan terus diaduk untuk memastikan gel membengkak sepenuhnya. Saat memasang kolom, masukkan gel yang bengkak ke dalam kolom sekaligus sesuai dengan persyaratan pemasangan kolom, perhatikan pemeliharaan pemasangan kolom basah, dan hindari gelembung atau patahan pada kolom. Setelah pemasangan kolom, diperlukan perlakuan kesetimbangan, yang melibatkan penggunaan larutan buffer dari kolom atas untuk menyeimbangkan setidaknya 3-5 volume kolom kolom kromatografi hingga garis dasar perekam menjadi stabil. Tujuan keseimbangan adalah membuat kolom gel mencapai keadaan stabil dan memastikan efek pemisahan.

Efek pemisahan dan ukuran sampel:
Efek pemisahan gel dekstran berkaitan erat dengan jumlah muatannya. Ukuran sampel yang berlebihan atau tidak mencukupi dapat mempengaruhi efisiensi pemisahan. Secara umum, jumlah pemuatan sampel filtrasi gel umumnya tidak lebih dari 5% volume dasar kolom. Untuk pemuatan sampel awal, disarankan untuk mengontrol volume unggun sebesar 1-2%, yang dapat disesuaikan tergantung pada situasi pemisahan. Volume sampel selama desalinasi dapat mencapai 20% dari volume kolom. Selain itu, pemilihan tinggi kolom juga berkaitan dengan persyaratan pemisahan. Jika tinggi kolom terlalu tinggi, lapisan gel akan menyebabkan tekanan balik yang lebih besar dan mempengaruhi efek pemisahan. Oleh karena itu, ketika memilih tinggi kolom, harus ditentukan berdasarkan berat molekul zat yang dipisahkan dan persyaratan pemisahan.

Metode elusi dan pengobatan regenerasi:
Ada banyak metode elusi untuk gel dekstran, termasuk elusi bebas air garam, elusi buffer, dan elusi gradien. Elusi bebas garam cocok untuk pemisahan zat bermolekul kecil; Elusi buffer cocok untuk pemisahan dan pemurnian zat bermolekul besar. Elusi gradien adalah proses penambahan zat gradien seperti NaCl ke buffer kolom atas, dan memisahkan zat dengan berat molekul berbeda dengan mengubah kekuatan ion eluen. Setelah beberapa waktu penggunaan, gel dekstran perlu diregenerasi untuk menghilangkan sisa protein yang mengendap dan membandel di dasar kolom. Metode perawatan regenerasi meliputi pembilasan terbalik berulang kali dengan air dan penyeimbangan dengan larutan buffer. Untuk gel yang awet-dalam jangka panjang, pencucian, dehidrasi, dan pengeringan juga diperlukan.

Masa berlaku dan kondisi penyimpanan:
Masa berlaku gel dekstran bervariasi menurut model dan kondisi penyimpanannya. Secara umum, masa berlaku gel dekstran bervariasi dari beberapa bulan hingga satu tahun. Selama masa berlakunya, gel sebaiknya disimpan di tempat yang kering, sejuk dan gelap. Gel yang tidak terpakai dapat disimpan pada suhu kamar; Setelah digunakan, gel perlu dirawat dengan benar sebelum disimpan. Untuk gel yang disimpan dalam waktu singkat, dapat dicuci bersih dan disaring hingga kering, ditambah bahan pengawet dalam jumlah tertentu (seperti natrium azida 0,02%) atau direndam dalam etanol 20% untuk mengendalikan pertumbuhan mikroba. Untuk gel yang awet-dalam jangka panjang, gel harus dikeluarkan dari kolom, dicuci, didehidrasi, dikeringkan, dan dibotolkan untuk disimpan.