Bubuk IPTG (Isopropil β-D-1-thiogalactopyranoside).adalah penginduksi terkenal yang banyak digunakan dalam biologi molekuler untuk ekspresi protein rekombinan dalam sel inang, biasanya E. coli. Di blog ini, kita akan mengeksplorasi bagaimana bubuk IPTG mempengaruhi ekspresi protein dalam berbagai fase pertumbuhan sel inang. Sebagai pemasok bubuk IPTG yang andal, kami memiliki pengetahuan mendalam tentang penerapan dan dampaknya, dan kami sangat ingin berbagi informasi ini dengan Anda.
Kode Produk : BM-2-5-133
Nama : Iptg
Nomor CAS: 367-93-1
DANA: C9H18O5S
UM: 238.3
EINECS No.: 206-703-0
Pasar: Indonesia, Inggris, Selandia Baru, Kanada dll.
Pabrikan: Pabrik Guangzhou BLOOM TECH
Layanan teknologi: Departemen Litbang-4
Pengiriman: Pengiriman sebagai nama senyawa kimia lain yang tidak sensitif.
Kami menyediakan bubuk Iptg, silakan merujuk ke website berikut untuk detail spesifikasi dan informasi produk.
Produk:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/api-researching-only/iptg-powder-cas-367-93-1.html
Memahami Peran IPTG dalam Ekspresi Protein
IPTG adalah analog dari alolaktosa, suatu metabolit laktosa. Dalam sistem operon lac E. coli, protein penekan lac berikatan dengan wilayah operator dalam kondisi normal, mencegah transkripsi gen hilir, yang bertanggung jawab untuk metabolisme laktosa. Ketika IPTG ada, ia berikatan dengan represor lac, menyebabkan perubahan konformasi pada represor dan melepaskannya dari operator. Hal ini memungkinkan RNA polimerase untuk berikatan dengan promotor dan memulai transkripsi gen target, yang mengarah pada ekspresi protein yang sesuai.
Fase Pertumbuhan Sel Inang yang Berbeda
Sel inang, seperti E. coli, melewati beberapa fase pertumbuhan yang berbeda: fase lag, fase eksponensial, fase stasioner, dan fase kematian.
Fase Keterlambatan: Ini adalah fase awal ketika sel beradaptasi dengan lingkungan baru. Sel aktif secara metabolik tetapi tidak membelah dengan cepat. Mereka mensintesis enzim dan komponen yang diperlukan untuk mempersiapkan pertumbuhan.
Fase Eksponensial: Pada fase ini, sel membelah dengan kecepatan yang konstan dan cepat. Jumlah sel berlipat ganda secara berkala. Aktivitas metabolisme sel berada pada tingkat tinggi, dan mereka secara aktif mensintesis protein dan komponen seluler lainnya.
Fase Stasioner: Ketika nutrisi habis dan produk limbah menumpuk, laju pertumbuhan melambat, dan jumlah sel baru yang dihasilkan sama dengan jumlah sel yang mati. Populasi sel mencapai titik tertinggi.
Fase Kematian: Karena kekurangan nutrisi dan adanya produk limbah beracun, jumlah sel yang mati melebihi jumlah sel baru, dan populasi sel mulai menurun.
Pengaruh IPTG terhadap Ekspresi Protein dalam Berbagai Fase Pertumbuhan
Fase Keterlambatan
Menambahkan IPTG selama fase lag mungkin tidak terlalu efektif untuk ekspresi protein. Karena sel masih dalam tahap adaptasi, mesin metabolismenya belum beroperasi sepenuhnya. Sel memerlukan waktu untuk menyesuaikan diri dengan lingkungan baru, mensintesis enzim penting, dan membangun komponen seluler yang diperlukan. Memperkenalkan IPTG pada tahap ini mungkin tidak menghasilkan transkripsi dan translasi gen target yang efisien. Sel mungkin tidak memiliki sumber daya yang cukup atau mekanisme pengaturan yang tepat untuk merespons penginduksi.
Fase Eksponensial
Fase eksponensial umumnya dianggap sebagai waktu optimal untuk menambahkan IPTG untuk ekspresi protein. Selama fase ini, sel-sel berkembang pesat, dan aktivitas metabolismenya tinggi. Ribosom, RNA polimerase, dan mesin translasi dan transkripsi lainnya sangat aktif. Ketika IPTG ditambahkan, ia dapat dengan cepat berikatan dengan represor lac, sehingga transkripsi gen target dapat dilanjutkan. Hasilnya, sejumlah besar protein target dapat disintesis dalam waktu yang relatif singkat. Selain itu, sel memiliki energi dan sumber daya yang cukup untuk mendukung sintesis protein rekombinan.
Fase Stasioner
Menambahkan IPTG selama fase stasioner dapat mengakibatkan terbatasnya ekspresi protein. Pada tahap ini, sel-sel berada di bawah tekanan akibat penipisan nutrisi dan akumulasi produk limbah. Aktivitas metabolisme sel mengalami penurunan, dan mesin seluler mungkin tidak seefisien pada fase eksponensial. Meskipun IPTG masih dapat berikatan dengan represor lac dan memulai transkripsi, sel mungkin tidak memiliki cukup energi atau sumber daya untuk memproduksi protein target dalam jumlah besar. Selain itu, stabilitas protein yang diekspresikan mungkin dipengaruhi oleh kondisi stres pada fase diam.
Fase Kematian
Tidak disarankan menambahkan IPTG pada fase kematian. Sel-selnya mati, dan fungsi metabolismenya sangat terganggu. Mesin seluler sedang rusak, dan kemampuan untuk mensintesis protein hampir tidak ada. Penambahan IPTG pada tahap ini tidak akan menghasilkan ekspresi protein yang signifikan.
Optimalisasi Ekspresi Protein yang Diinduksi IPTG
Untuk mencapai hasil ekspresi protein terbaik, beberapa faktor perlu dipertimbangkan.
Konsentrasi IPTG: Konsentrasi IPTG yang optimal bergantung pada sel inang spesifik dan protein target. Konsentrasi yang terlalu rendah mungkin tidak sepenuhnya menginduksi ekspresi gen target, sedangkan konsentrasi yang terlalu tinggi dapat menjadi racun bagi sel dan mempengaruhi pertumbuhan dan sintesis proteinnya.
Waktu Induksi: Durasi induksi juga memainkan peran penting. Waktu induksi yang lebih lama dapat menghasilkan hasil protein yang lebih tinggi, namun juga dapat meningkatkan risiko degradasi protein dan akumulasi produk limbah beracun.
Kondisi Pertumbuhan: Mempertahankan kondisi pertumbuhan yang optimal, seperti suhu, pH, dan ketersediaan nutrisi, sangat penting untuk ekspresi protein yang efisien. Faktor-faktor ini dapat mempengaruhi laju pertumbuhan dan aktivitas metabolisme sel inang.
Produk Terkait dan Aplikasinya
Sebagai pemasok bubuk IPTG, kami juga menawarkan produk kimia berkualitas tinggi lainnya untuk tujuan penelitian. Misalnya,Filgotinib CAS 1206161-97-8adalah senyawa yang telah menunjukkan potensi dalam bidang penelitian anti-inflamasi.4-Bromotrifenilamin CAS 36809-26-4banyak digunakan dalam sintesis organik dan ilmu material.10-HDA CAS 14113-05-4memiliki berbagai aktivitas biologis dan menarik dalam bidang penelitian farmasi.
Produk kami
Kesimpulan dan Ajakan Bertindak
Kesimpulannya, waktu penambahan bubuk IPTG selama fase pertumbuhan sel inang sangat penting untuk ekspresi protein yang efisien. Fase eksponensial umumnya merupakan waktu terbaik untuk induksi, sedangkan penambahan IPTG selama fase lag, stasioner, atau kematian mungkin tidak memberikan hasil yang memuaskan. Dengan mengoptimalkan konsentrasi IPTG, waktu induksi, dan kondisi pertumbuhan secara hati-hati, peneliti dapat mencapai ekspresi protein tingkat tinggi.
Jika Anda berminat dengan bubuk IPTG atau produk kimia lainnya, kami persilahkan Anda menghubungi kami untuk pengadaan dan diskusi lebih lanjut. Kami berkomitmen untuk menyediakan produk berkualitas tinggi dan layanan pelanggan terbaik untuk memenuhi kebutuhan penelitian Anda.
Referensi
- Miller, JH (1972). Eksperimen dalam genetika molekuler. Laboratorium Pelabuhan Cold Spring.
- Sambrook, J., & Russell, DW (2001). Kloning molekul: Panduan laboratorium. Pers Laboratorium Cold Spring Harbor.
- Studi, FW, & Moffatt, BA (1986). Penggunaan bakteriofag T7 RNA polimerase untuk mengarahkan ekspresi selektif gen kloning tingkat tinggi. Jurnal Biologi Molekuler, 189(1), 113-130.